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Mach1-T1超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞，英文名Mach1-T1 Super Competent Cells ，是一種可以用于快速質(zhì)粒高效轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒克隆用，且能抵抗噬菌體感染的克隆用E. coli Mach1-T1即用型化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉(zhuǎn)化，在嚴(yán)格按照使用說明進(jìn)行操作時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可以達(dá)到5.0±0.5×108cfu/μg DNA。
Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態(tài)細(xì)胞之一，質(zhì)粒熱激轉(zhuǎn)化的Mach-T1涂于氨芐平板后，可在8小時(shí)后挑取克隆，保證了單日內(nèi)完成內(nèi)涂板、挑克隆的高效性。過夜生長的單克隆接種4小時(shí)后可進(jìn)行質(zhì)粒小量制備。
Mach1-T1菌株的基因型F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398 endA1 tonA [1]，該菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍(lán)、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對(duì)噬菌體T1和T5的抗性。
保存條件：
-80ºC保存，一年內(nèi)有效。避免反復(fù)凍融，通常制備6個(gè)月后轉(zhuǎn)化效率隨保存時(shí)間延長而逐漸降低。
注意事項(xiàng)：
感受態(tài)細(xì)胞禁止反復(fù)凍融，并應(yīng)盡可能避免凍融，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率大幅下降。
感受態(tài)細(xì)胞融化后，須盡快加入待轉(zhuǎn)化樣品，不宜在無轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的情況下放置時(shí)間超過10分鐘或以上時(shí)間，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
待轉(zhuǎn)化樣品的體積通常不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%，樣品體積過大會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率下降。
感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于溫度變化非常敏感，需要避免出現(xiàn)不應(yīng)有的使用說明之外的溫度變化。
感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于機(jī)械力非常敏感。加入待轉(zhuǎn)化樣品時(shí)應(yīng)輕柔操作，不能使用移液槍吹打混勻。
通常僅建議取部分樣品用于轉(zhuǎn)化，這樣萬一遇到轉(zhuǎn)化失敗的情況，還留有樣品可以再次進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
使用說明：
1.解凍感受態(tài)細(xì)胞。取感受態(tài)細(xì)胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分鐘以上的時(shí)間。解凍后須盡量在10分鐘內(nèi)使用，放置時(shí)間過長會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。
2.DNA樣品的轉(zhuǎn)化。取一管感受態(tài)細(xì)胞，加入DNA樣品，例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等，輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動(dòng)約2-3次以混勻，立即冰浴靜置30min。注意：所用DNA體積通常不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%，混合時(shí)不得使用移液器進(jìn)行吹打。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，冰浴靜置約10分鐘，后續(xù)可以直接涂板并培養(yǎng)過夜；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議冰浴靜置30min并嚴(yán)格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復(fù)蘇培養(yǎng)等步驟，以提高轉(zhuǎn)化效率。
3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激45秒。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中切勿晃動(dòng)離心管。
4.復(fù)蘇培養(yǎng)。加入900μl不含抗生素的LB培養(yǎng)基，顛倒數(shù)次混勻，37℃搖床約150rpm復(fù)蘇培養(yǎng)1小時(shí)。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，復(fù)蘇培養(yǎng)10-20分鐘也完全足夠了；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議嚴(yán)格進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)操作。
5.收菌涂板。約5000g室溫離心1min，沉淀細(xì)菌，吸除約900-950μl上清，余下的約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體，隨后涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。注意：如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，可以僅取少量進(jìn)行涂板；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議取所有重懸的菌液涂板。
6.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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