BL21(DE3)超級感受態(tài)細胞，英文名BL21(DE3) Super Competent Cells，是一種可以用于非毒性蛋白表達的E. coli BL21即用型化學感受態(tài)細胞。使用pUC19質(zhì)粒進行熱激活轉(zhuǎn)化，在嚴格按照使用說明進行操作時，轉(zhuǎn)化效率可以達到1.0±0.5×107cfu/μg DNA。
BL21表達大腸桿菌RNA聚合酶，適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(如pGEX、pMAL等)。該菌株不表達T7 RNA聚合酶，不適合于T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(如原核表達載體pET系列)。
BL21系最早開發(fā)的原核表達菌株，在其基礎(chǔ)上衍生了BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3)等一系列原核表達菌株。
BL21菌株的基因型為E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]κ-12(λS) [1]。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達量，從而減少重組蛋白的水解，提高表達產(chǎn)量；hsd基因變異可致菌株細胞內(nèi)的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失，從而提高PCR產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。
保存條件：
-80ºC保存，一年內(nèi)有效。避免反復凍融，通常制備6個月后轉(zhuǎn)化效率隨保存時間延長而逐漸降低。
注意事項：
感受態(tài)細胞禁止反復凍融，并應(yīng)盡可能避免凍融，反復凍融會導致轉(zhuǎn)化效率大幅下降。
感受態(tài)細胞融化后，須盡快加入待轉(zhuǎn)化樣品，不宜在無轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的情況下放置時間超過10分鐘或以上時間，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
待轉(zhuǎn)化樣品的體積通常不宜超過感受態(tài)細胞體積的10%，樣品體積過大會導致轉(zhuǎn)化效率下降。
感受態(tài)細胞對于溫度變化非常敏感，需要避免出現(xiàn)不應(yīng)有的使用說明之外的溫度變化。
感受態(tài)細胞對于機械力非常敏感。加入待轉(zhuǎn)化樣品時應(yīng)輕柔操作，不能使用移液槍吹打混勻。
通常僅建議取部分樣品用于轉(zhuǎn)化，這樣萬一遇到轉(zhuǎn)化失敗的情況，還留有樣品可以再次進行轉(zhuǎn)化。
使用說明：
1.解凍感受態(tài)細胞。取感受態(tài)細胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分鐘以上的時間。解凍后須盡量在10分鐘內(nèi)使用，放置時間過長會影響轉(zhuǎn)化效率。
2.DNA樣品的轉(zhuǎn)化。取一管感受態(tài)細胞，加入DNA樣品，例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等，輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動約2-3次以混勻，立即冰浴靜置30min。注意：所用DNA體積通常不宜超過感受態(tài)細胞體積的10%，混合時不得使用移液器進行吹打。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴增，冰浴靜置約10分鐘，后續(xù)可以直接涂板并培養(yǎng)過夜；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議冰浴靜置30min并嚴格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復蘇培養(yǎng)等步驟，以提高轉(zhuǎn)化效率。
3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激45秒。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中切勿晃動離心管。
4.復蘇培養(yǎng)。加入900μl不含抗生素的LB培養(yǎng)基，顛倒數(shù)次混勻，37℃搖床約150rpm復蘇培養(yǎng)1小時。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴增，復蘇培養(yǎng)10-20分鐘也完全足夠了；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議嚴格進行復蘇培養(yǎng)操作。
5.收菌涂板。約5000g室溫離心1min，沉淀細菌，吸除約900-950μl上清，余下的約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體，隨后涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。注意：如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴增，可以僅取少量進行涂板；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議取所有重懸的菌液涂板。
6.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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