病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒（離心柱型）
產(chǎn)品名稱：病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒（離心柱型）；Virus Genomic DNA/RNA Kit
貨號：QYM124
產(chǎn)品內(nèi)容：
名稱
50T
儲存條件
使用方法及注意事項
Buffer GL
15ml
室溫保存
-
Buffer GW1 (concentrate)
13ml
室溫保存
首次使用前加入無水乙醇17ml
Buffer GW2 (concentrate)
15ml
室溫保存
首次使用前加入無水乙醇45ml
Buffer RE
10ml
室溫保存
-
Proteinase K
1ml
-20℃保存
-
Spin Columns With Collection Tubes
50
室溫保存
-
自備試劑：無水乙醇(CAS：64-17-5)；0.9% NaCl溶液
產(chǎn)品簡介
本試劑盒適用于從新鮮或冷凍的血漿、血清、病毒原液、鼻咽拭子和無細胞體液中提取高質(zhì)量的病毒DNA/RNA。獨特的緩沖液/蛋白酶K體系能迅速裂解病毒，降解蛋白，DNA/RNA吸附于硅基質(zhì)膜上，通過快速的漂洗、離心步驟，去除雜質(zhì)，得到高純度的病毒DNA/RNA。本試劑盒具有高效、快速、方便之特點，所得病毒DNA/RNA不含蛋白、核酸酶和其他雜質(zhì)，可直接用于PCR、RT-PCR、Real-Time qPCR、印跡等分子生物學實驗。
產(chǎn)品特點
1. 簡便快速：1小時內(nèi)可獲得高純度的病毒DNA/RNA；
2. 安全：無需使用苯酚、氯仿等有機溶劑抽提，使用安全；
3. 穩(wěn)定：所得病毒DNA/RNA純度高，重復性好，方便下游應用。
注意事項
1. 樣品避免反復凍融，否則會使蛋白變性或產(chǎn)生沉淀，導致提取的DNA/RNA片段小，提取量下降。
2. 如Buffer GL、Buffer GW1結(jié)晶或產(chǎn)生沉淀，可在56℃水浴溶解。
3. 所有離心步驟均為室溫下操作。
實驗操作
1. 取1.5ml離心管（自備），加入20μl Proteinase K。
2. 向離心管中加入200μl血清或血漿。加入200μl Buffer GL，渦旋震蕩15秒。
注意：(1) 樣本體積不足200μl可以加入0.9%NaCl（自備）補足。
(2)為確保樣本有效裂解，加入Buffer GL后，需將樣本與Buffer GL充分混勻。
3. 56?C 孵育15分鐘，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。
4. 加入250μl無水乙醇，渦旋震蕩15秒，室溫放置5分鐘，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。
注意：如果環(huán)境溫度超過25?C，無水乙醇應在冰上預冷后使用。
5. 將步驟4中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12,000 rpm（~13,400×g）離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入500μl Buffer GW1（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入500μl Buffer GW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需進一步提高DNA純度，可重復步驟7。
8. 向吸附柱中加入500μl無水乙醇，12,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
9. 12,000 rpm 離心3分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇殘留會影響后續(xù)的酶促反應（酶切、PCR等）。
10. 將吸附柱置于一個新的滅菌的1.5ml離心管中（自備，若提取RNA，則需要RNase-free離心管），向吸附柱膜的中間部位懸空加入30-100μl Buffer RE或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘，收集核酸溶液。
注意：(1) 如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍），pH值低于7.0時洗脫效率不高。
(2) 如需長期保存，請將DNA溶液置于-20?C保存，RNA溶液置于-70?C保存。
(3) 如果要提高DNA/RNA的終濃度，可以將步驟10所得的DNA/RNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復步驟10。
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