| 歡迎來(lái)到啟研生物[ 會(huì)員登錄 ] [ 立即注冊(cè) ] |
| 歡迎來(lái)到啟研生物[ 會(huì)員登錄 ] [ 立即注冊(cè) ] |
名稱：蛋白A/G 瓊脂糖凝膠（PAG-瓊脂糖凝膠）
英文名稱：Protein AG Agarose, PAG-agarose
目錄號(hào)：QY2003
規(guī)格：2ml
儲(chǔ)存形式：包含500ul PAG-瓊脂糖凝膠和1.5ml 凝膠儲(chǔ)存液
產(chǎn)品介紹
蛋白A/G 瓊脂糖凝膠（PAG-瓊脂糖凝膠）是重組蛋白A 蛋白G 融合蛋白（r-PAG）與瓊脂糖凝膠微球（Agarose）偶聯(lián)，制備的抗體純化（親和層析）介質(zhì)。與單獨(dú)的蛋白A 或蛋白G 瓊脂糖凝膠相比，本品具有更寬廣的結(jié)合范圍，可以與人類、小鼠、大鼠、兔等多物種各亞型IgG 結(jié)合。本品適用于IP 實(shí)驗(yàn)及抗體純化，包括人類IgG, 小鼠IgG, 兔IgG 單抗和多抗的純化和檢測(cè)。本品結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，結(jié)合IgG 效率高，對(duì)純化體系pH 值要求不嚴(yán)格，允許在pH5.0-8.0 之間進(jìn)行結(jié)合。
產(chǎn)品性能
性能 指標(biāo)
基質(zhì) 6%瓊脂糖微球
配基 蛋白 A 蛋白 G 融合蛋白
配基密度 ≥7mg PAG/ml 瓊脂糖微球
載量 7-10mg IgG/ml 瓊脂糖微球
粒徑 45-165μm
推薦流速/最大流速 100/750 cm/h
pH 穩(wěn)定范圍-工作/清洗 3~9/2~10
儲(chǔ)存緩沖液 PBS+20%乙醇
儲(chǔ)存溫度 4℃
保質(zhì)期 1 年
實(shí)驗(yàn)例
實(shí)驗(yàn)名稱：IP/免疫沉淀
試劑及耗材準(zhǔn)備：
IP 緩沖液：25mMTris, 150mM NaCl, pH7.2
洗脫緩沖液：100mM Glycine, pH2.7
中和緩沖液：1MTris-HCl, pH9.0 細(xì)胞裂解液（抗原樣本）
實(shí)驗(yàn)方案
本實(shí)驗(yàn)方案使用50ul PAG-瓊脂糖凝膠（200ul PAG-瓊脂糖凝膠混懸液），可結(jié)合25-250ug 抗體。具體操作中，可根據(jù)抗原、抗體的加樣量及抗原與抗體的結(jié)合能力，調(diào)整所使用的PAG-瓊脂糖凝膠混懸液、IP 緩沖液、洗脫緩沖液體積。
1. 在1.5ml 離心管中加入50-1000ul 抗原樣本和一定濃度的抗體。4℃孵育過(guò)夜。
2. 在新的離心管中加入200ul PAG-瓊脂糖凝膠混懸液，1000g ，4℃離心5min，棄上清。
3. 向PAG-瓊脂糖凝膠中加入0.5ml IP 緩沖液，用上述條件離心，棄上清。重復(fù)2 次。
4. 將抗原-抗體復(fù)合物加入PAG-瓊脂糖凝膠中，室溫旋轉(zhuǎn)孵育2h。
5. 將孵育好的瓊脂糖凝膠-免疫復(fù)合物用上述條件離心，棄上清。
6. 加入0.5ml IP 緩沖液，用上述條件離心，棄上清。重復(fù)3-4 次。
7. 加入50ul 洗脫緩沖液，室溫孵育5min。用上述條件離心，收集上清。重復(fù)1 次。
8. 合并兩次離心收集的上清，加入10ul 中和緩沖液，將pH 調(diào)整至7.0 左右。
9. SDS-PAGE 電泳檢測(cè)目的蛋白。或?qū)⒛康牡鞍走M(jìn)行透析、脫鹽，供其他實(shí)驗(yàn)使用。
替代方案：用 0.5ml 蒸餾水洗滌瓊脂糖凝膠-免疫復(fù)合物，用上述條件離心，棄上清。向瓊脂糖凝膠-免疫復(fù)合物中加入蛋白上樣緩沖液，95℃加熱5min。離心收集上清，SDS-PAGE 電泳檢測(cè)目的蛋白。
商品信息已成功復(fù)制，啟研竭誠(chéng)為您服務(wù)
